豬流感病毒H1N2亞型檢測試劑盒

豬流感病毒(Swine Influenza Virus, SIV)是豬呼吸道疾病的主要病原之一,目前已發(fā)現(xiàn)的豬流感病毒有H1N1、H1N2、H1N7、H2N3、H3N1、H3N2、H3N6、H4N6、H5N1及H9N2亞型。我國從2004年分離到第1株H1N2豬流感病毒以來,連續(xù)又在不同省份分離到H1N2亞型重配豬流感病毒,這類病毒能否引起區(qū)域性的或者全國性的豬流感暴發(fā),值得更深一步研究。 本研究根據(jù)H1N2毒株的參考序列設計RT-PCR及測序引物,對本實驗室分離豬流感病毒H1N2亞型檢測試劑盒、鑒定的的兩株H1N2亞型豬流感病毒(SW/HeB/10/06和SW/TJ/1/07)進行了全基因組序列測定,并利用生物信息學軟件對其8個基因片段進行進化分析。結果SW/HeB/10/06和SW/TJ/1/07兩個分離毒株的親緣關系較遠,8個基因片段的同源性:PB2為81.4%,PB1為83.2%,PA為83.0%,HA為90.1%,NP為81.6%,NA為91.7%,M為84.1%,NS為80.4%。毒株SW/TJ/1/07的HA及NA基因與我國的第1株H1N2分離株(SW/ZJ/1/04)同源性*,其6個內部基因分別與歐洲分離的兩株H1N1亞型豬流感病毒具有*的同源性;毒株SW/HeB/10/06的HA、NA及NS基因片段與禽流.感病毒A/Turkey/MO/24093/99(H1N2)同源性*;其它5個內部基因分別與H1N1人流感病毒和H3N2及H1N2豬流感病毒的相應基因片段具有*同源性,SW/HeB/10/06為我國分離到的第1株人-禽-豬流感基因三重配病毒。以上結果表明我國所出現(xiàn)的H1N2毒株遺傳背景較為復雜。 通過血凝抑制(HI)交互試驗,從實驗室分離的4株H1亞型豬流感病毒中篩選出一株具有抗原代表性的毒株SW/HeN/11/05 (H1N1)作為免疫原,制備抗H1亞型豬流感病毒的血凝素蛋白的單*抗體。將SW/HeN/11/05毒株接種9～11日齡雞胚進行增殖,收取尿囊液,濃縮、純化,與佐劑混勻,免疫6周齡BALB/c雌性小鼠,取免疫后小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞SP2/0融合。采用HI和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法篩選陽性細胞*,經連續(xù)多次*培養(yǎng)后獲得2株能穩(wěn)定分泌抗H1亞型HA蛋白特異性單*抗體的細胞株4E6B2和3E11C4。兩株單*抗體能夠與H1亞型豬流感病毒毒株發(fā)生特異性的反應,而與H3、H5、H9亞型豬流感病毒及其它常見豬病病原無交叉反應。 總之,本研究分析了兩株H1N2亞型豬流感病毒的遺傳進化關系,為兩株親緣關系較遠的重配豬流感病毒,這兩個H1N2亞型毒株的分離為豬作為混合器產生新型重配流感病毒提供了更進一步的證據(jù);同時,制備了兩株抗H1亞型豬流感病毒HA蛋白的單*抗體細胞株,為下一步建立H1亞型豬流感病毒診斷方法提供了物質基礎和條件。